菌种鉴定方法

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首先你要确定待鉴定的菌种一定是纯种。如果菌种不纯，所观察到的现象则是混合现象，这样自然不会得到正确的结果。因此在鉴定之前，首先要将菌种纯化。纯化方法，一般有2种：平板划线单菌落分离法和单细胞分离法。前一种操作简便，效果良好，适用范围广。

菌种鉴定的方法一般有常规鉴定和分子生物学方法：

（1）常规鉴定：菌落形态观察、革兰氏染色、菌毛染色、糖类分解实验、吲哚实验、淀粉水解实验、V-P实验、甲基红实验、柠檬酸盐利用实验、硝酸盐还原实验、接触酶实验等

（2）分子生物学方法：细菌16SrDNA菌种鉴定：提取DNA，特定引物PCR扩增，PCR产物纯化测序，进化树分析；真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定流程也是一样的。

临床微生物检验之病原性真菌检验知识

　真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。大部分真菌对人类有益，能引起人类疾病的病原性真菌主要包括浅部真菌和深部真菌。下面是我为大家带来的病原性真菌检验的知识，欢迎阅读。

　一、常见单细胞真菌的形态观察

　1 、新型隐球菌墨汁负染色片：可见菌体呈球形，大小不一，有很厚的荚膜，包围在菌体周围，透明发亮，并可见发芽的菌体。

　2、白色念珠菌菌体形态：用患者的棉拭子标本常法涂片，革兰氏染色，镜检。显微镜下可见菌体呈卵圆形，较葡萄球菌大2-5倍，细胞出芽伸长而成假菌丝，在假菌丝生长点上有芽生孢子及沿假菌丝顶端生长的`大而圆的厚膜孢子。

　二、皮肤丝状菌的检查

　材料：

　病人的甲屑、皮屑或毛发、10%KOH溶液、载玻片、盖玻片、小镊子、普通光学显微镜等。

　方法：

　1 、采标本：用钝刀在手、足、体癣损害部位边缘轻轻刮取皮屑，甲癣可用小刀刮取病损指(趾)甲深层碎屑。

　2、制片：用小镊子取少许皮(甲)屑标本置于载玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一盖玻片，在火焰上缓慢加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后轻轻加压使成薄片，驱走气泡并吸去周围溢液。

　3 、镜检：先用低倍镜观察有无真菌菌丝或孢子，再用高倍镜观察菌丝、孢子的特征。镜检时光线应稍弱，使视野稍暗。阳性标本常可查见分支菌丝或孢子。

　三、真菌的培养

　材料：

　菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。

　方法：

　1、一般培养：分别将新型隐球菌、白色念珠菌、絮状表皮癣菌接种于沙保氏培养基，于22℃-28℃下培养(深部真菌可培养于37℃环境)，一周后观察菌落特征。真菌菌落在形态上可分为三大类：

　酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润。

　类酵母型菌落：同酵母型菌落，圆形、较大、白色，但菌落根部有假菌丝长入培养基内。

　丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式。有许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌落中央有皱折，外围有放射状沟。其正面和背景又可显示各种不同颜色。

　2 、小培养(玻片法)：在无菌平皿中先倾注10-15ml沙保葡萄糖琼脂，待凝固后，无菌操作将琼脂切成约0.5cm的方块，再将琼脂块移放在灭菌的载玻片上，然后在小块培养基四边接种已分纯的真菌菌种，盖上无菌盖玻片，移入有一定湿度的无菌平皿内，置22℃-28℃孵育。动态观察生长过程，根据菌丝和孢子的特点鉴定真菌类别。

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